※ 引述《LabMumi (LaborMumi)》之銘言
: https://i.imgur.com/7Qcnz8s.jpg
: 姆咪
: 為蛇摸又有人說ct過30會驗不到
: 不是多跑幾輪循環多*幾次2就好了嗎
: 有沒有卦
首先PCR大致分成三步驟
1.DNA變性(Denaturation)，利用高溫使DNA模板變單股；
2.引子黏合(Annealing)，降低溫度讓引子黏合到模板上；
3.引子延長(Extension)，以適當的溫度讓聚合酶沿模板合成新的一股DNA片段。
https://i.imgur.com/FsNXZMp.jpg
這個網路上查都有
然而重點在於設計的這個primer
primer能不能夾出目標的DNA片段就要看各廠商的功夫了
通常依夾的目標跟用途不同
primer的長度設計在15-數百mer之間
primer的長度跟黏合時的環境溫度決定了primer的準確性
並且更深入來說
越長的primer以及越多越久的複製次數則導致了primer亂黏的情形發生
亂黏 就會在錯誤的地點亂複製
複製出來就不是我們想要的
順帶一提
現在常用的所謂的PCR
是real time pcr
https://i.imgur.com/A7MRsGI.jpg
跟傳統PCR不同於呈現及定量的方式
傳統PCR在複製40次左右後還要拿出來跑膠才能知道片段大小及濃度高低
real time pcr透過特別設計的探針來達到目標DNA發光的效果
然後再透過一起紀錄吸光值
https://i.imgur.com/qXdsqVp.jpg
看圖說故事 很簡單吧
但要注意的是
因為冠狀病毒是RNA病毒
所以第一部要先將單股RNA 反轉錄成cDNA
才能往下做實驗
不過這不是重點